cursor

Rainbow Arch Over Clouds

domingo, 25 de julio de 2021

Ejemplo de ADN recombinante en la naturaleza y de ADN recombinante artificial - Microtia

ADN recombinante en la naturaleza

El neumococo (Streptococcus pneumoniae) toma ADN de su entorno y es "transformado" por recombinación ya que toma material genético de un trasfondo y lo inserta en sí mismo. Se da por tres mecanismos: transformación, conjugación y transducción. La absorción de ADN del medio ambiente por transformación se asocia con la recombinación homóloga.


 ADN recombinante artificial en la Microtia

La microtia dependiendo del grado puede afectar al oído interno, en ese caso se usa terapia génica para restaurar la función auditiva.

Los principales instrumentos de edición de genes son enzimas diseñadas a base de nucleasas: Cre-recombinasa y Cas9 que introducen ADN monocatenario o bicatenario, que estimulan la maquinaria de reparación del ADN innato. Se da través de dos técnicas: unión de extremos no homólogos (NHEJ) o reparación dirigida por homología (HDR).

Tema: Terapias genéticas emergentes en la pérdida auditiva

Objetivos: Desarrollo de intervenciones terapéuticas apropiadas que se dirijan a los diversos tipos de células por perdida auditiva.

Gen o secuencia a clonar: se han dirigido a Vglut3, Tmc1 , Whirlin , Ush1-c , Clarin-1 y GJB2.

Enzimas de restricción: Cas9 y Cpf1

Enzima ligasa: Enzima ligasa de ADN T4

Vector: AAV (virus adenoasociado), AdV2 y AdV5 (adenovirus), Lentivirus (retrovirus).

Célula receptora: células eucariotas: de Corti, células de Hensen, células gliales.

MTG (Mecanismo de transferencia o inserción del gen): transfección de ADN mediada por campos eléctricos (electroporación)

MIC (Métodos de identificación de clones): Secuenciación de ADN


Referencia Bibliográfica:

viernes, 16 de julio de 2021

Técnica con Microarray en la expresión de genes de la Artritis reumatoide

Se extrajo el ARN total de células de sangre periférica de los pacientes. Se utilizaron microarrays de genoma completo CodeLink y cada individuo se midió en duplicado. Los genes significativamente expresados se seleccionaron a través de SAM (Significative Analysis of Microarray). Posteriormete el agrupamiento de estos genes se llevó a cabo de acuerdo a su similitud GO (Gene Ontology). Resultados: 25 genes implicados en autoinmunidad y respuesta inflamatoria se encontraron diferencialmente expresados, sub y sobre-expresados en pacientes de AR




sábado, 10 de julio de 2021

Prueba PCR en pacientes con Artritis Reumatoide

Tema: Comprensión actual de un papel emergente del gen HLA-DRB1 en la artritis reumatoide

Objetivo: Identificar el gen HLA-DRB1 e indicar su importancia en la morbilidad de la AR

Muestra biológica: Sangre (Linfocitos T)

Tipo de Ácido nucleico: ADN genómico

Gen o secuencia a amplificar: HLA-DRB1

Tipo de PCR: PCR estándar y NGS

Visualización: Lectura en software, alineando las lecturas de secuencia con los alelos registrados en la base de datos.

La presencia de los alelos HLA-DRB1*04 y HLA-DRB1*09 está relacionada con la susceptibilidad de presentar AR en los pacientes.


PCR y NGS



sábado, 3 de julio de 2021

Alteraciones de la Epigenómica en la Artritis reumatoide

Las alteraciones de la epigenómica contribuyen a conocer la patogenia de la artritis reumatoide (AR) modificando el ADN y las histonas. El epigenoma está formado de compuestos químicos y proteínas que se unen al ADN y dirigen acciones como la activación o desactivación de genes. Los reguladores clave de la AR incluyen la metilación del ADN por secuenciación de bisulfito de genoma completo, perfiles de miARN, variaciones genéticas por secuenciación de exoma completo y perfiles de ARNm de sinoviocitos. Además, modificaciones de histonas (H3K27ac, H3K4me1, H3K4me3, H3K36me3, H3K27me3 y H3K9me3)




REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29765031/

2. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30820026/

3. Imagen: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5953939/figure/Fig1/